real time PCR为何用cDNA 而不是用直接提取的DNA做一般反转录而成的cDNA是单链的,要形成双链,还需要其他步骤,比如两步法中的pcr步骤。
是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作:一、cDNA第二链的合成:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。
其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase 。
real time PCR为何用cDNA 而不是用直接提取的DNA做一般反转录而成的cDNA是单链的,要形成双链,还需要其他步骤,比如两步法中的pcr步骤。
练习册上的cDNA的合成只需要逆转录酶,但储存在cDNA文库的不应该是双链。cDNA是双链DNA。
在高中生物里可能是为了方便只提了第一步里的逆转录酶,事实上在整个制作步骤中,你可以看到由第一链产生第二链的过程中是需要DNA聚合酶的。
不用在意这些,等大学里学到相关知识的时候会学到的。
双链